Metod 1: Extraktionsmetod (metoden som för närvarande används i mitt land; den ger lägre renhet men ger lägre produktionskostnader.)
Extraktion av oxytocinlösning: Ta 100 g torkat hypofyspulver och 30 g kvartspulver, placera dem i en kulkvarn och tillsätt destillerat vatten. Utför extraktionen fyra gånger med samma procedur. Volymerna destillerat vatten som tillsätts för varje steg är som följer: 1,4 L för de två första extraktionerna och 1,3 L för de efterföljande två. Varje extraktion utförs under 45 minuter, följt av centrifugering för att samla upp vätskan; den återstående återstoden utsätts sedan för ytterligare extraktion. De fyra resulterande extrakten kombineras för att ge oxytocinlösningen. Sammanfattningsvis: Torkat posterior hypofyspulver [vatten, kulkvarn] → Oxytocinextrakt → Kromatografisk separation.
Ta 1 500 g av för-behandlad syntetisk zeolit, tillsätt 20 L av en 0,25 % ättiksyralösning och -efter omrörning-häll blandningen i en jonbytarkolonn-. När nivån av ättiksyralösningen har sjunkit till en punkt 2–3 cm över ytan av zeolitbädden, tillsätt omedelbart oxytocinextraktet. Upprätthåll en lämplig flödeshastighet och samla upp det resulterande vita, grumliga eluatet (denna fraktion innehåller främst oxytocin, eftersom oxytocin har en isoelektrisk punkt [pI] på 7,7-medan vasopressin har ett pl på 10,9-vasopressin bildar lätt positiva joner och adsorberas således på kolonnen). Så snart vätskenivån i extraktet sjunker till ytan av zeolitbädden, tillsätt omedelbart destillerat vatten och fortsätt att samla upp det grumliga eluatet tills flödet upphör. Justera pH för det uppsamlade grumliga eluatet till 3,5 med isättika. Värm snabbt lösningen i ett vattenbad till 95 grader, bibehåll denna temperatur i 3 minuter, kyl sedan snabbt lösningen och kyl den över natten. Sammanfattningsvis: Oxytocinextrakt [HAc, Syntetisk Zeolitkolonn] → Grumligt eluat [HAc, Uppvärmning] → Separerad lösning → Adsorption & Eluering. Följande dag, filtrera den kylda lösningen. Till filtratet, tillsätt en 10 % bentonituppslamning under omrörning (tillsätt 3 ml uppslamning per 100 ml filtrat). Fortsätt omrörningen i 1 timme för att underlätta adsorptionen och centrifugera sedan blandningen. Testa supernatantvätskan med en sulfosalicylsyrareagenslösning; frånvaron av någon fällning indikerar att adsorptionsprocessen är fullbordad. Om adsorptionen är ofullständig, upprepa bentonitbehandlingsprocessen; kombinera därefter bentonitfällningarna som erhållits från båda adsorptionsstegen. Bentoniten elueras fyra gånger med användning av 1 % ättiksyra (med volymer på 1,6 L, 1,4 L, 1,2 L respektive 0,8 L). För varje eluat tillsätts *tert*-butyltriklorid när lösningen upphettas till 80 grader; temperaturen höjs sedan till 95 grader, kyls snabbt till 25 grader och antingen filtreras eller centrifugeras. De fyra resulterande filtraten kombineras för att bestämma styrkan och vasopressingränsen. Processflödet är som följer: Kyld lösning [Filtrering] → Filtrat [Bentonituppslamning] → Adsorbat [1 % HAc] → Eluat. Beredning av oxytocininjektion:
Den analyserade oxytocinlösningen, som har uppfyllt kvalitetsstandarder, späds till en koncentration av 5 U/ml eller 10 U/ml. Det filtreras sedan genom en No. 4 eller No. 5 sintrad glastratt, fylls i ampuller och steriliseras med strömmande ånga vid 100 grader i 30 minuter för att ge den slutliga produkten. Processflödet är som följer: Oxytocinlösning (godkänd analys) [Filtrering, fyllning, sterilisering] → Oxytocininjektion.
Regenerering av syntetisk zeolit: Den syntetiska zeoliten tvättas två gånger med destillerat vatten. Därefter tillsätts 1,5 1 vatten (beräknat på 500 g zeolit) och 150 g natriumklorid, och blandningen rörs om i 2 timmar för att tvätta bort och avlägsna vasopressin. Zeoliten tvättas sedan med destillerat vatten tills inga kloridjoner finns kvar. En lämplig mängd vatten tillsätts och pH justeras till 9 med användning av natriumhydroxid; blandningen omrörs i 30 minuter, varefter supernatanten dekanteras. Zeoliten tvättas med destillerat vatten, pH justeras till 5,5–6 med svavelsyra, och den tvättas igen med vatten tills den nästan är neutral. Det filtreras sedan för att avlägsna överflödigt vatten och torkas vid 105 grader för framtida bruk. Före användning tillsätts en lämplig mängd vatten och pH justeras med isättika under omrörning för att möjliggöra blötläggning. Beredning av 10 % bentonituppslamning: Bentonit och vatten blandas i ett mass-till{18}}volymförhållande på 1:10. Blandningen mals i ungefär 1 timme, under vilken tid ättiksyra tillsätts för att bibehålla ett stabilt pH på 3,5. Den resulterande uppslamningen förvaras sedan i ett kylskåp för framtida användning. Metod 2: Kemisk syntes. Först syntetiseras heptapeptidamiden (segment 3–9) utgående från bensyloxikarbonyl-leucin *p*-nitrofenylester; därefter syntetiseras bensyloxikarbonyl-S-bensylcystein-tyrosinazid (segment 1–2); och i det tredje steget syntetiseras oxytocin.